PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

 Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。     

苏云金芽胞杆菌杀虫原粉对铬离子吸附热力学研究

通过静态吸附试验,研究了苏云金芽胞杆菌原粉对水溶液中铬离子(Cr6 )的吸附热力学特性。铬离子初浓度依次为50、100、150、200、250、300、400、500mg·L~(-1),菌体浓度固定为1g·L~(-1),pH值为2,分别在5℃、20℃、35℃、50℃条件下进行等温吸附,采用Freundlich方程和Langmuir方程进行拟合。结果显示,苏云金芽胞杆菌原粉对铬离子的吸附符合Langmuir(r>0.979)方程和Freundlich(r>0.977)方程。吸附焓△H为1.39￣2.33kJ·mol~(-1),吸附自由能ΔG为-3.75￣-2.84kJ·mol-1,吸附熵ΔS为15.2￣18.8J·mol~(-1)。苏云金芽胞杆菌原粉对铬离子的吸附是吸热过程,吸附能够自发进行。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维索酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2+、Pb2+、Fe3+对酶有抑制作用,Ba2+、Fe2+对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法

采用室内实验技术,研究了直接从苏云金芽胞杆菌胞晶混合物提取原毒素的方法。胞晶混合物依次用0.5mol·L-1NaCl和无菌去离子水洗涤3次,洗涤后的沉淀物用0.05mol·L-1NaOH 0.1mmol·L-1PMSF溶液溶解10min,10000r·min-1离心15min去除不溶物。上清液以25%乙酸调至pH4.4,得原毒素蛋白沉淀,冷冻干燥。SDS-PAGE电泳扫描结果表明,原毒素分子量为130kDa,在提取过程中没有发生降解。该提取方法具有操作简便、成本低、效率高等优点。     

紫贻贝多糖脱除蛋白质方法的研究

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝（Mytilus edulis linnaeus）多糖蛋白。通过正交中心组合实验，应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明，酶法脱蛋白的最优工艺参数为：pH7．1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0．5U／mg粗多糖，温度41℃，氯化钙加入量7．4mg／g，时间3h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白，适宜的工艺条件为：氯仿：正丁醇=5：1，料液比4：1，振摇时间20min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78．5％；与其它传统脱蛋白方法比较，该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想，为多糖的分离纯化研究提供了有益的参考。     

Mutagenesis of the Bacillus edaphicus Strain NBT and Its Effect on Growth of Chili and Cotton

A strain NBT capable of dissolving silicate minerals and promoting plant growth was treatedwith UV+LiCl. Thirty-two mutants tolerable to 2% NaCl solution were obtained. However, through the sur-vival experiments in high osmatic pressure, high temperature and different acidities, two mutants of NBT-6and NBT-19 were finally obtained. They could survive from 10 % NaCl solution and tolerate 55℃, acidic (pH4) and alkalic (pH 10) conditions. The mutants had the same ability to release K from silicate minerals as thestarting strain NBT. Pot experiments with chili and cotton showed that both the mutants developed in the rhi-zosphere soils. The available P and K contents in the rhizosphere soils and plant biomass increased through in-oculating these bacteria.     

嗜碱芽孢杆菌木聚糖酶在苇浆漂白中的应用初探

采用嗜碱芽孢杆菌NT-9产生的木聚糖酶对苇浆进行生物漂白预处理,并分析了酶处理苇浆的理化性能。结果表明,在酶剂量5-25IU·g-1样品、50℃、pH8.6条件下处理120min,苇浆失重率随酶剂量的增加而上升,苇浆的白度也有一定提高。X-衍射分析显示,酶处理苇浆纤维的相对结晶度降低了2.43%,扫描电镜也证实酶处理苇浆纤维表面形貌发生了一些明显的变化。     

枯草芽胞杆菌DarA蛋白的鉴定及其原核表达

目前,我国全面禁止饲料中添加抗生素,寻找新型的抗生素替代物是当前研究的热点之一。本研究旨在分离枯草芽胞杆菌SXAU18所产具有抗菌活性的蛋白物质,并通过原核表达系统获得其具有抗菌活性的重组蛋白。试验选用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、分子截留等蛋白提取技术,对枯草芽胞杆菌SXAU18产生的抗菌蛋白进行分离纯化;通过SDS-PAGE技术和牛津杯扩散法检测分离到的蛋白物质的抑菌活性;通过质谱、生物信息学技术分析预测目的蛋白的基因序列;利用大肠杆菌表达系统和AKTA蛋白纯化系统对目的蛋白进行表达和纯化;借助牛津杯扩散法鉴定重组蛋白的抑菌活性。结果表明,枯草芽胞杆菌SXAU18所产的抗菌物质为相对分子质量15 ku左右的蛋白质,含有共同的特定氨基酸序列—GSSIFGLAPGK,对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌有较好的抑菌活性;通过质谱分析和生物信息学推测SXAU18所产的（主要）抑菌蛋白为DarA;经诱导表达的重组蛋白DarA主要以可溶性上清蛋白形式存在,纯化后的DarA蛋白为单一条带,并具有良好的抑菌活性。结果提示,分离自枯草芽胞杆菌SXAU18的抗菌蛋白DarA具有抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌生长的活性,且可以通过体外表达获取该蛋白。     

饲用枯草芽孢杆菌对育肥猪生长性能、养分消化、粪便特征及经济效益的影响

文章旨在评估日粮添加不同水平的饲用枯草芽孢杆菌对9～24周龄育肥猪生长性能、养分表观消化及粪便特征的影响。将600头9周龄平均初始体重为（22.96±0.09）kg的商品猪随机分为3组,每组5个重复,每个重复40头。对照组饲喂基础日粮,T1和T2组肥猪分别饲喂基础日粮+100和200?mg/kg枯草芽孢杆菌（3×108?CFU/kg）,试验共进行15周。结果：与对照组相比,T2组15?w育肥猪体重显著提高4.37%（P＜0.05）,同时T1和T2组1～15?w育肥猪的平均日增重较对照组分别显著提高3.81%和5.35%（P＜0.05）,饲料报酬分别显著提高4.44%和4.44%（P＜0.05）。T1和T2组育肥猪干物质表观消化率分别较对照组显著提高8.75%和9.37%（P＜0.05）,同时T1组育肥猪有机物表观消化率较对照组显著提高了6.13%（P＜0.05）。日粮添加100和200?mg/kg枯草芽孢杆菌可以显著降低6和15?w育肥猪粪便中氨气浓度和大肠杆菌数量（P＜0.05）,同时T1和T2组15?w育肥猪粪便中乳酸杆菌数量也显著高于对照组（P＜0.05）。结论：日粮添加100～200?mg/kg饲用枯草芽孢杆菌（3×108?CFU/kg）可改善9～24周龄育肥猪的饲料报酬,改善干物质表观消化率,降低粪中氨气浓度和大肠杆菌数量。 [关键词]育肥猪|枯草芽孢杆菌|生长性能|养分消化|粪便特征     

Dietary Bacillus subtilis C-3102 Supplementation Enhances the Exclusion of Salmonella enterica from Chickens

Among the reported probiotic Bacillus strains, B. subtilis C-3102 has the unique potential to improve feed uptake under stress conditions in the broilers, piglets, and cows. In this study, we sought to evaluate the protective effect of feed additive probiotic Bacillus subtilis C-3102 against Salmonella enterica infection of specific pathogen-free (SPF) chicks in floor pens in two experiments. In the experiment-1, the chicks in the control group (n=32) were fed a basal diet and those in the C-3102 group (n=32) were fed a basal diet supplemented with 1×10⁶ CFU/g of feed for 28 days. On day 7 post-challenge with S. enterica, there was no significant change in the body weight between both the groups throughout the test period, whereas detection rates of S. enterica in the C-3102 group were significantly lower in the cecum and liver on days 21 and 14 post-challenge, respectively. In the experiment-2, minimum dosage of C-3102 cells required to protect Salmonella infection was evaluated using 3 dosages. Chicks were divided into four groups, fed with different dosages of C-3102 (1×10⁶, 5×10⁵, 3×10⁵, and 0 CFU/g of feed), and challenged with S. enterica (2.8×10⁸ CFU/chicken). S. enterica infection was completed within 7 days post- challenge and was almost excluded from the liver and spleen on day 21 post- challenge in the control group. Average values showed a trend for higher infection rates in the control group >3×10⁵>5×10⁵>1×10⁶ CFU/g on days 14 and 21 post-challenge. These results suggest that B. subtilis C-3102 supplementation has the potential to reduce S. enterica infection rates and/or to accelerate the exclusion of S. enterica from the chicks.